En los primeros días de la biología molecular, los científicos utilizan comúnmente mapeo de restricción para comprender los genes que estaban estudiando. En los laboratorios de investigación modernos, mapeo de restricción no está actualizado en gran parte porque la secuenciación se ha vuelto más ampliamente disponibles y más económico que en el pasado. Sin embargo, hay casos en los que un mapa de restricción puede ser adecuada para un investigador para llevar a cabo sus investigaciones. El enfoque general de la cartografía de restricción implica el uso de enzimas digestivas para romper físicamente una muestra de ADN. Una vez que se miden los productos de la digestión, se puede "volver a montar" las piezas y deducir la secuencia original del ADN. Cosas que necesitará Las enzimas de restricción
muestra de ADN
Solución tampón
Hielo y agua caliente baño
Gel electroforesis equipos
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Digestión de ADN
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Añadir un enzima de restricción para su muestra de ADN. Utilice EcoR1, una enzima utilizada, por ejemplo.
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Agregar esta mezcla a una solución intermedia, que es esencialmente un lugar para que la reacción se produzca.
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elevar la temperatura de la reacción, como se indica en el manual Biolabs de Nueva Inglaterra. Cada enzima de restricción tiene una temperatura de reacción específica a la que funciona mejor. Además, cada enzima tiene una secuencia de nucleótidos específica que está diseñado para atacar. EcoRI escaneará y cortar el ADN en la secuencia de nucleótidos CAATTC. Esta orden exacto de nucleótidos debe existir para la enzima de atar y cortar el ADN. Hasta este punto, todos los materiales deben mantenerse en hielo para evitar que la actividad no deseada.
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Después de permitir que se produzca la reacción, como se indica en el manual, ejecute la mezcla en una máquina de electroforesis en gel para separar el ADN fragmentos basan en el tamaño. Los fragmentos más pequeños se moverán más lejos a través del gel.
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Medir la distancia recorrida por cada fragmento de ADN. Estos cinco pasos se deben repetir con varias enzimas diferentes por separado.
Construcción de la Restricción Mapa y Ubicación 6

Con los datos obtenidos a partir del gel, recopilar toda la información que haya encontrado el uso de los diferentes enzimas de restricción.
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Deducir el orden de los sitios de restricción mediante la comparación de las diferentes longitudes de los fragmentos producidos por cada enzima. Por ejemplo, si la enzima # 1 produce dos fragmentos de la misma longitud y la enzima # 2 produce tres fragmentos de la misma longitud, se puede concluir que la enzima # 1 corta a la mitad del ADN y enzimas # 2 corta el ADN en tercios.

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Usando las conclusiones extraídas en el paso 2, monte el orden de los sitios de restricción para el ADN.