Cómo manchar geles de agarosa

Visualización de ácido nucleico o proteína es esencial en la realización de la electroforesis en gel de agarosa . Si se trabaja sin tinción del gel , usted no será capaz de ver donde la muestra que se está probando se ha alcanzado , y por lo tanto las mediciones de tamaño molecular , por ejemplo, se verá seriamente restringida. Teñir el gel usando un colorante común y bien probado - como el bromuro de etidio ( EtBr ), que es fluorescente bajo la luz ultravioleta ( UV) cuando intercaladas en las moléculas de ADN o ARN . El tinte le ayudará a llevar a cabo su experimento , mostrando las moléculas en la muestra como marcas de color azul oscuro . Cosas que necesitará
guantes y gafas de seguridad
en gel de agarosa
El bromuro de etidio
pipeta (Gilson para pequeñas cantidades ) Cargando búfer de
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Usar guantes de seguridad que son delgadas, pero de protección y permitir que los dedos y las manos el movimiento sin restricciones . Use una pequeña pipeta para extraer algunas EtBr (o mancha equivalente) de su envase .
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Añadir 0,5 microgramos por mililitro de tu mancha elegido su muestra. Cubra la muestra y mezclar manualmente. Varios batidos deberían ser suficientes .
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Añadir un tampón de carga con carga negativa a la mezcla con una pipeta . Esto permite que la muestra teñida para ser visto a simple vista , a la luz natural y elimina la necesidad de costosos , UV perjudiciales que de otra manera degradar las moléculas en las que esté interesado. Xileno cianol es un tampón de carga comúnmente utilizado , pero otros están disponibles . Asegúrese de seleccionar un tampón de carga que se ejecutará en la misma velocidad que la molécula que se está midiendo . Xileno cianol funciona a la misma velocidad que los fragmentos de ADN que son 5.000 pares de bases (pb) de longitud.
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Utilice una pipeta limpia para aplicar la muestra mejorada para los pozos en el inicio de su gel de agarosa . El volumen de aplicar depende del tamaño de los peines de gel ( así grosor y la longitud y espesor de gel ) . Teñir su muestra y no el control de modo que se puede determinar los parámetros que le interesan (como el peso molecular) correcta y eficazmente .
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Alternativamente , realice el sur de secante como una forma de visualizar su muestra . Transferir el ADN a una membrana de nitrocelulosa . Exponga a una sonda de hibridación . Esto no se manchaba , como tal , sino que proporciona una alternativa adecuada , tal como se describe por Access Excellence .