degradación de Edman - un proceso bien conocido para identificar el aminoácido N - terminal de una proteína - requiere la escisión del aminoácido , seguido de la identificación mediante cromatografía o electroforesis . Los procesos automatizados aceleran secuenciación N-terminal . Los hechos

proteínas producidas dentro de las células individuales actúan como hormonas , enzimas y otros importantes reguladores . La mutación genética que resulta en una proteína anormal podría tener consecuencias graves para la salud .
Proceso

El aminoácido N-terminal se escinde por tratamiento con uno de varios reactivos , después se hidroliza para formar un aminoácido por separado . Cromatografía de capa fina , HPLC o electroforesis determina el tamaño del aminoácido , y lo compara con un estándar de tamaño conocido . El nuevo extremo N -terminal de la proteína restante se puede escindir de manera similar para la identificación.

Automatización

Applied Biosystems liderado el desarrollo de la automatización de la degradación de Edman , que se une una proteína purificada a una membrana y lo trata con isotiocianato de fenilo . Del aminoácido libre inyecta automáticamente en un sistema de HPLC para la identificación.

Complicaciones

proteínas deben permanecer relativamente puro y libre de contaminantes para determinar con precisión el aminoácido N -terminal . Límites de degradación de Edman requieren grandes moléculas de proteínas fragmentadas en pequeñas cadenas de péptidos ya no 50 aminoácidos .