se utilizan tampones de bloque para estabilizar proteínas recubiertas en ensayos inmunoquímicos y , de acuerdo con inmunoquímicos Technologies, que reducen el ruido en los resultados de los ensayos individuales , aumentar la sensibilidad del ensayo , aumentar la eficiencia y la vida útil de las placas recubiertas y mejorar la reproducibilidad . Tampones de bloques inhiben la unión no específica después de las proteínas y anticuerpos han sido unidas entre sí y se absorbió sobre la placa de ensayo recubierta durante un ELISA ( un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas ) . Debido a que las pruebas ELISA se puede construir de diferentes maneras, hay varias opciones de bloqueo de buffers para satisfacer las necesidades individuales de un técnico . Cosas que necesitará
muestra Antibody
muestra Proteína en la placa de ensayo
tampón de bloqueo
Cubiletes del laboratorio
pipeta
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Seleccione el amortiguador de bloqueo en función del tipo de ELISA va a realizar . Las opciones de tampón incluyen: Bloqueadores generales ( andamios proteínas de mamíferos ) para sándwich y antígeno -down ELISA ; BB2 neptuno bloqueo ( andamio de proteínas de animales no mamíferos ) por ELISA especies de mamíferos y humanos ; Synblocks BB3 (pequeños andamios, sintéticos moleculares ) para de alta resistencia ELISA de bloqueo ; y BB4 - phosph libre (pequeño, sintéticos , andamios moleculares sin fósforo ) para ELISA de unión de alta conjugadas marcado con una enzima , no específica. El bloqueador de búfer BB4 es especialmente útil en los ensayos que utilizan la fosfatasa alcalina, químicamente tratada o placas de reacción de vidrio y en la microfluídica , según lo informado por las Tecnologías de Inmunoquímica , una empresa que suministra todos los equipos de ensayo correspondiente.
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Aspirar ( eliminar ) la solución de recubrimiento inclinando la placa de modo que el exceso se descarta la capa la placa de ensayo con el antígeno (proteína ) o el anticuerpo mediante el vertido de la solución a través de las placas . en un recipiente separado .
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pipeta de 300 a 400 microlitros de el tampón de bloqueo en cada pocillo de la placa de ensayo utilizando una pipeta .
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Incubar las soluciones para alrededor tres horas o durante la noche a temperatura ambiente ( 4 grados Celsius). De acuerdo con la multinacional de Tecnologías de la célula , el búfer de bloque de la derecha va a conservar sus reactivos , que pueden ser valiosos porque son costosos y pueden ser escasas .
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Lavar el exceso de proteína para eliminar las cantidades en exceso como esto puede reducir la detección de su antígeno diana , según lo informado por Pierce neto .
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en este punto , la reacción es completa y usted debe tener un plato elaborado que contenga la cantidad adecuada de anticuerpo unido al antígeno , lo que dará resultados consistentes y reducir la variación de placa a placa en ensayos grandes , comparativos.
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en el caso de un microarray , utilice una solución de bloqueo avanzado como Array es bloquearlo Buffer , que ha sido diseñado específicamente para inactivar cualquier grupos reactivos que permanecen después de una " impresión " de sustratos en portaobjetos que contienen súper - epoxi , super y super amina - aldehído al tiempo que conserva la nitidez de la señal resultante , la prevención de la fluorescencia y facilitar la reducción de ruido . Este reactivo tiene una vida útil de un año si se almacena correctamente, es muy pura y se proporciona como un concentrado listo para su uso.