las células T , que pertenecen a una familia de células inmunes llamadas linfocitos, se generan durante una respuesta inmune adaptativa . Las células T se originan a partir de células madre de médula ósea y maduran en el timo . Hay varios tipos diferentes de células T, cada uno con una función diferente . Las células T se distinguen unos de otros por el receptor de antígeno de células T adjunto. Un subconjunto de células T lleva el marcador de CD4 y ayuda a inducir una respuesta inmune . Fuentes de células T

células T se pueden obtener de varias fuentes, incluyendo el bazo , los ganglios linfáticos y el timo , pero la sangre periférica es la fuente más fácilmente disponible de células T con fines de cultivo . Las muestras de sangre son examinados minuciosamente para las infecciones y otros contaminantes y cuidadosamente manejados bajo un gabinete de seguridad . Las células T se cultivan por varias razones , incluyendo mediciones de toxicidad y para estudiar las respuestas de vacunas inmunológicas.
Aislamiento

células T se separan habitualmente a partir de muestras de sangre entera por la densidad - gradiente de separación , como las células T son menos densas que las células rojas de la sangre tales como eritrocitos y por lo tanto extraídos por centrifugación . Una solución de sal neutra apropiado se añade a la muestra de sangre , seguido de una solución de Ficoll Isopaque . De Ficoll Isopaque tiene una densidad mayor que las células T , pero menos que los eritrocitos durante la centrifugación y forma una capa intermedia entre ambas células , permitiendo células T para ser retirados de la parte superior . Las células T son centrifugó adicionalmente , se eliminó el sobrenadante , y una pequeña alícuota se cuentan para determinar la viabilidad celular . Las células se utilizan ya sea directamente para experimentos o criopreservados para su uso futuro . Reactivos
Criopreservación

crioconservación se preparan con antelación para evitar la degradación de las células T en la sala de temperatura . Si no es posible , las células se mantienen en hielo o refrigeradas . Reactivos consisten en medios de cultivo de células y 10-13 por ciento de albúmina de suero humano (HSA ) de proteínas , así como medios de cultivo celular y 10 por ciento dimetil sulfóxido ( DMSO ) . DMSO minimiza deshidratación, cambios de pH , y cambios en la concentración de electrolito asociado con la congelación . Las células T se volvieron a suspender en el medio de cultivo celular que contiene reactivo y HSA en un criotubo . El DMSO que contiene reactivo se añade poco a poco a las células y se agitó suavemente . Las células se transfieren a un recipiente que contiene isopropanol congelación para asegurar una disminución gradual de la temperatura y se almacenan .
Descongelación

cuando T - células se descongelan , se elimina un criotubo de almacenamiento y se incubaron a 37 grados Celsius . Posteriormente , se añade lentamente el medio de descongelación adecuada a las células hasta que se alcanza el doble del volumen , se transfiere a un tubo separado , y se centrifugó . Benzonase veces se añade al medio de descongelación para evitar la formación de grumos de células T muertas . El sedimento se centrifugó se respondió en medios de cultivo de células y la viabilidad celular se evalúa . Las células T son entonces listo para utilizar para los respectivos experimentos.