Las transferencias Western Protocolos

A transferencias Western son un tipo de mancha de proteína que se utiliza en el campo médico, los laboratorios de biología y otras disciplinas científicas sobre una base diaria. Las transferencias Western , cuando se realiza correctamente, son una forma de estudiar la expresión de proteínas en muestras de tejido . Dado que puede haber diferencias en los parámetros de cada muestra, hay una serie de protocolos que se deben seguir a fin de obtener resultados precisos. Realización de Lavados

Después de incubar las membranas en las soluciones de anticuerpos para la cantidad apropiada de tiempo , que varía dependiendo de qué anticuerpo solución está siendo utilizado , Encor Biotecnología establece que la membrana debe someterse a tres lavados a temperatura ambiente en TBS . TBS es una solución que tiene una composición y pH específico para el lavado . La membrana se debe lavar en entre cada introducción de una nueva solución de anticuerpos .
Preparación Mezcla tinción

Según WesternBlotting.org , la preparación de la mezcla de tinción inmediatamente antes de la aplicación de al miembro logrará los mejores resultados. Hay varios tipos de soluciones de tinción , algunos de los cuales pueden ser adquiridos y algunos de los cuales deben ser mezclados en el laboratorio. Tinción de quimioluminiscencia , de acuerdo con Encor Biotecnología , proporciona la mayoría de la información por la mancha pero también es el más caro y requiere un cuarto oscuro para el desarrollo . Peroxidasa de rábano picante y tinción de fosfatasa alcalina Blotting hay otras opciones para las manchas. Independientemente del método que se utilice , la preparación de la mezcla justo antes de su uso es esencial.
Utilizando un tampón

Después de aplicar la solución de tinción seleccionado, el uso de un tampón es clave . En la tinción de quimioluminiscencia , la aplicación de un acetato sobre la parte superior de la solución de tinción es de protocolo , de acuerdo con WesternBlotting.org . Peroxidasa de rábano picante tinción requiere el uso de un tampón de acetato de amonio con el fin de obtener el producto tinción marrón . El tampón usado en la fosfatasa alcalina Blotting , que debe crear un producto de coloración púrpura, es más complicado de hacer y puede ser comprado ya hecho .