Protocolo de ensayo de unión competitiva

El ensayo de unión competitiva es un experimento que determina la capacidad de unión de proteínas o productos químicos para proteínas especializadas que se encuentran en una superficie de la célula , llamados receptores . El método se utiliza a menudo en la investigación médica , pero también es capaz de determinar qué fármacos se unen a los receptores y modificar la actividad del receptor , que a su vez puede alterar el comportamiento celular . Celular Preparación

volver a suspender las células en fosfato helada buffer salino ( PBS). Medir la concentración de proteína para confirmar los niveles iguales de proteína mediante el uso de un ensayo de proteínas disponible en el mercado especializado .
Ensayo

Añadir una proteína marcada con radiactividad sabe que se une al receptor , la ligando , a la suspensión de células o tejido . Añadir el competidor , que es el fármaco de ensayo o la proteína en estudio y se incuba con el ligando radiactivo y suspensión de células . Debe ser estudiado una gama de concentraciones del fármaco de ensayo . Después de la incubación , el ligando unido y no unido por separado y medir la radiactividad.
Análisis de Datos

La medida habitual por determinar es la mitad de la máxima concentración que inhibe el receptor conocido de otra manera como CI50 . Esto se calcula mediante el trazado de las concentraciones en una escala logarítmica en el eje X de un gráfico mientras que el eje Y representa el porcentaje de inhibición ; una curva sigmoidea , que es una forma de S , debe ser generado . La IC50 es el punto de inhibición del 50 por ciento , y la concentración correspondiente se puede leer en el gráfico .