citometría de flujo es una herramienta que es útil en el estudio de proteínas de la célula . Se utiliza la emisión de luz o la fluorescencia de las proteínas dentro de la célula . Los anticuerpos o sondas marcadas con fluorescencia se utilizan para estudiar las proteínas específicas . La citometría de flujo se utiliza para diagnosticar una serie de enfermedades , incluyendo el cáncer, sino que también es útil en la investigación médica. Células de fijación

Las células deben ser fijos para mantener la estabilidad de las proteínas intracelulares. Un número de fijadores se puede utilizar tal como formaldehído o acetona enfriada con hielo . Después de la fijación , la membrana de la célula necesita ser permealized para permitir que el anticuerpo entre en la célula . Los detergentes tales como Triton o NP- 40 , o helado de metanol se puede utilizar para hacer los agujeros en la membrana celular .

Tinción

Lavar las células en el tampón de bloqueo 0,5 por ciento de albúmina de suero bovino diluido en solución salina tamponada con fosfato , de BSA /PBS . Las células se incubaron en tampón de bloqueo para reducir la unión no específica . Añadir anticuerpo primario diluido en tampón de bloqueo y dejar incubar a la temperatura ambiente , para la longitud de tiempo optimizado . Lavar con tampón de bloqueo.
Análisis

Incubar el anticuerpo secundario , que está marcado con una etiqueta fluorescente, a temperatura ambiente durante 30 minutos. Para eliminar las células de lavado de anticuerpos no unidos en tampón de bloqueo . Centrifugar las células en un gránulo y luego se resuspenden en PBS y se analizan en el citómetro de flujo.