La técnica de perfusión proporciona un rápido y uniforme fijación a todas las células individuales presentes en el tejido. Un 4 por ciento fijador paraformaldehído se pasa a través del sistema vascular para obtener tejido de interés. El sitio principal objetivo para la administración de drogas en un órgano en particular se puede identificar con la ayuda de esta técnica. Perfusión también ha ayudado a los científicos a comprender la organización estructural y funcional del cerebro humano. Cosas que necesitará
Animal (rata o mono) de la bomba de perfusión
, vaso
fijador (4 por ciento paraformaldehído)
agujas de jeringa
goteo perfusión establecidos
Tijeras
bisturí
Pinzas
0,9 por ciento salina
Ice cuadro
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1

Prepare fresco ciento paraformaldehído 4 mezclando 40 g de paraformaldehido en 800 ml de agua. Calentar la solución a 60 º C mientras se agita. Enfriar la solución a 4 º C. Ajustar el pH a 9,5 con la ayuda de un medidor de pH. Para ajustar el pH, añadir ácido acético glacial para obtener el pH deseado
2

Configure la bomba de perfusión;. Conectar todas las piezas de vidrio y una aguja de perfusión. Ejecutar 100 ml de agua del grifo a través de la tubería de la bomba de perfusión para eliminar cualquier residuo de las piezas de vidrio. Coloque un vaso de precipitados de fijador en una caja de hielo.
3

Abra el extremo del tubo de perfusión y colóquelo en un vaso de precipitados fijador. Escala el volumen de la solución de acuerdo con el tamaño del animal. Ahora ajustar la válvula de la bomba de perfusión de una lenta y constante goteo. Cierre la válvula. Llene el aparato de perfusión con el 0,9 por ciento (peso /volumen) de solución salina.
4

Establecer los instrumentos de cirugía cerca de la mesa de operaciones. Dar una inyección de la anestesia a los animales según su peso corporal (0,5 mg de ketamina /kg). Colocar el animal sobre la mesa de operaciones, con la espalda hacia abajo.
5

hacer un corte con un bisturí, a lo largo de la membrana. Con los grandes tijeras, secundarios romo hacia abajo, cortar los tejidos conectivos en la parte inferior del diafragma. Exponer el corazón. Sostenga el corazón latiendo con las pinzas e insertar una aguja en el ventrículo izquierdo.
6

Abra la válvula de la bomba de perfusión para permitir el flujo de un 0,9 por ciento solución salina. Asegúrese de que la solución fluye libremente y el animal está vivo. El corazón del animal debe estar superando continuamente. Una vez que la sangre se sustituye por la solución salina, cambie la solución de paraformaldehído al 4 por ciento.
7

Detener la perfusión y diseccionar un tejido de interés. Mantenga tejido en el mismo medio a 4 C.