Protocolo de la célula de congelación
Las células deben ser congeladas cuando están saludables y en crecimiento activo con un porcentaje de viabilidad 90. Se debe tener cuidado en la manipulación y la centrifugación de alta velocidad y vigorosa pipetear o aspiración se debe evitar para mantener la viabilidad y prevenir el daño celular.
Crioprotección
Un agente crioprotector es utilizado como un reemplazo para el agua intracelular. El agente evita que los cristales de hielo y la deshidratación se produce en las células. Glicerol esterilizada y esterilizada dimetilsulfóxido se utilizan a menudo en una concentración de 5 por ciento a 15 por ciento (volumen por volumen) ya sea diluido en suero de ternera fetal o medio de crecimiento, dependiendo del tipo de célula.
Congelación y almacenamiento
células en la mezcla de congelación deben enfriarse lentamente. Si un congelador programable no está disponible, crioviales pueden ser envueltos en el tejido o colocados en espuma de poliestireno, lo que puede ralentizar el proceso de congelación. Las células deben mantenerse a menos 80 grados centígrados durante 24 horas y luego se transfieren a nitrógeno líquido para su almacenamiento a largo plazo.
Descongelación
células congeladas deben ser descongeladas rápidamente. Un baño de agua a 37 grados Celsius puede ser utilizado. Se debe tener cuidado con las células almacenadas en nitrógeno líquido, sin embargo, como el nitrógeno líquido puede entrar en los viales y pueden explotar de la descongelación. La mezcla de congelación debe ser diluido en medio de cultivo. La viabilidad celular se debe evaluar con el colorante azul de tripano y las células cultivadas de forma normal.