Protocolos de infección por retrovirus
Cierto equipo de laboratorio de laboratorio y suministros necesarios para ayudar en el proceso de la infección retroviral. El equipo incluye 1 ayuda pipeta, 1 pipeta-man, 1 campana de cultivo de tejidos de 37 grados centígrados y 32 grados centígrados incubadoras, y una centrífuga Eppendorf. Los suministros incluyen placas de cultivo de tejidos, una pipeta Pasteur desechables, sobrenadante retroviral cualificado, polibreno esterilizada por filtración y el sulfato de protamina esterilizada por filtración.
Preparación del teléfono para la infección
Prior a la infección, las células de destino deben ser divididos en una placa de cultivo de tejidos y se incubaron durante la noche en una de 37 grados Celsius incubadora con cinco por ciento de CO2. El propósito del período de incubación es crear células que son 50% de confluencia. Preparación de las células de antemano es necesario asegurarse de que las células están optimizados para el proceso de infección. El Nolan Lab de la Universidad de Stanford recomienda que la infección de células comienzan siempre comienzo al infectar las células 3T3 NIH para ayudar a optimizar los resultados de la prueba.
Infectar las células
Después del período de incubación es largo, los investigadores deben asegurarse de que las células son sanos y de la confluencia derecha. Uso de la campana de cultivo de tejidos, la materia celular se aspiró y un sobrenadante viral se aplica a las células. Una vez aplicado, el plato debe estar meció suavemente hacia adelante y hacia atrás para asegurarse de que se distribuya uniformemente. Las células deben entonces ser spin-inocularon por su inclusión en la centrífuga Eppendorf y haciéndolos girar a 2.500 rpm durante noventa minutos a una temperatura de 30 grados Celsius. Después, las células deben ser incubadas a 32 grados centígrados durante uno o dos días. El virus se reemplaza con células extraídas y se coloca en la incubadora para ser analizados desde tres a siete días después de la infección inicial.