ELISA o inmunoensayo enzimático , se utiliza como herramienta de diagnóstico en la medicina y en la investigación biológica para cuantificar la cantidad de una proteína específica . ELISA utiliza anticuerpos para detectar la proteína de interés y un reactivo que produce un color . La cantidad de color se refiere a la cantidad de proteína . Cultivo Celular

Las células deben ser colocados en los pocillos de una placa de 96 pocillos con 100 microlitros de medio de cultivo y las células se deja reposar durante la noche. Si usted está estudiando la reacción de las células de un factor , las células deben ser privadas de suero durante 24 horas y luego se estimularon con el factor en estudio.
Fijación y anticuerpo primario

Después de la retirada de los medios de comunicación , las células se tratan con un fijador, como el 3 por ciento de formaldehído , o metanol . La membrana de la célula necesita ser permeabilizadas para permitir que el anticuerpo para penetrar en la célula . La permeabilización se puede lograr mediante el uso de 0,1 por ciento de Triton , metanol si no se ha utilizado previamente . La unión no específica se pueden evitar con el uso de 10 por ciento de suero de ternera fetal diluido en solución salina tamponada con fosfato . Después de retirar el bloque, el anticuerpo primario se puede aplicar y se incubó durante una hora.
Anticuerpo secundario y Stain

Eliminar el anticuerpo primario , y lavar tres veces . Añadir un anticuerpo secundario ligado a un agente de detección , tal como peroxidasa de rábano picante . Incubar durante una hora . Washington Añadir solución de sustrato quimioluminiscente. Desarrollar y escanear la placa de la intensidad del color .