Proteína de unión de MBP Purificación Protocolos
Durante este protocolo, los técnicos lavan 20 ml de la resina de polímero de amilosa con solución ATRIS a pH 7,4, cloruro de sodio, mercaptoetanol (ME) y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), de acuerdo a los protocolos Online. Se añaden, se centrifugaron y se analizaron en electroforesis en gel de muestras de células. Las muestras también se analizaron en un cromatógrafo, donde los técnicos eluato u observar los componentes de la solución, mientras que pasa a través de la columna de cromatografía.
Pequeña Escala de fusión MBP proteínas Purificación
Según la Universidad Hebrea de Jerusalén, los biólogos utilizan el isopropil BD-1-tiogalactopiranósido (IPTG), el cultivo de células giro reactivo durante 10 minutos a 8.000 revoluciones por minuto a 39,2 grados Fahrenheit. Más tarde, eliminar el líquido sobrenadante y se mezclan tampón PBS frío a la muestra, que se divide en varios tubos y se centrifugaron de nuevo. Las muestras se mantuvieron a -112 grados Fahrenheit para el análisis posterior.
Unión a maltosa proteína de fusión etiqueta de purificación
etiquetas de afinidad son moléculas genéticamente modificados utilizados en biología molecular para detectar y purificar proteínas. Este protocolo es un conjunto complejo de procedimientos divididos en tres etapas, que incluyen la construcción de marcador de la proteína de polihistidina (HisMBP); un experimento piloto para evaluar la solubilidad de la proteína, y la purificación a gran escala de moléculas de MBP, según Nature Protocols . Además de las muestras de E. coli, los técnicos utilizan ampicilina, kanamicina, IPTG, anhidrotetraciclina, monohidrato de glucosa, tampón de lisis celular, el ADN polimerasa, PCR primers, Tris-acetato-EDTA y bromuro de etidio.