Las células adherentes Protocolo

Las células en cultivo son ya sea una forma cultivadas en suspensión, tales como células de la sangre, o células tales como fibroblastos que requieren una superficie a la que se pueden adherir. Algunas de las superficies de recubrimiento pueden requerir en diferentes matrices extracelulares dependiendo del tipo de célula y el estudio. Todos los cultivos celulares requerir a realizar son las condiciones asépticas. Entorno Óptimo

La mayoría de tipos de células pueden ser cultivadas en medio de Eagle modificado de Dulbecco, (DMEM) o Roswell Park Memorial Institute (RPMI) con la adición de 10 por ciento de suero de ternera fetal, 2 milimoles de la aminoácido glutamina y antibióticos, por ejemplo, 100 unidades de penicilina y estreptomicina 0,1 miligramos por mililitro. Las células se mantienen en sus medios de comunicación en un incubador humidificado a 37 grados centígrados y el dióxido de carbono al 5 por ciento.
Dividir

Se comprobará todos los días de la infección, la muerte o el crecimiento . Una vez que el matraz de cultivo de tejidos es 80 por ciento recubierto en las células, las células se deben dividir para mantener la salud de las células y la fase logarítmica de crecimiento. Los medios de comunicación se eliminan y las células se lavan en solución salina tamponada con fosfato. Las células adherentes requieren la adición de tripsina y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) para eliminar las proteínas de adhesión celular. Agitación suave debería eliminar las células. Los medios de comunicación hay que añadir para neutralizar la solución de tripsina /EDTA.
Subcultivo

Las células diluidas y solución tryspin /EDTA se pueden centrifugar para sedimentar y lavado las células. Las células se pueden volver a suspender en los medios de comunicación y se diluyeron y se volvieron a sembrar en nuevos matraces. Cada vez que las células se dividen el número de pases células se incrementa en uno.
Medios Cambio

medios se cambian dos veces a la semana mediante la eliminación de los viejos medios de comunicación y su sustitución con nueva, se calienta medios.