citometría de flujo es una herramienta que es útil en el estudio de las proteínas de la célula . Se utiliza la emisión de luz o fluorescencia de las proteínas dentro de la célula . Los anticuerpos o sondas marcadas con fluorescencia se utilizan para estudiar las proteínas específicas . La citometría de flujo se utiliza para diagnosticar una serie de enfermedades , incluyendo el cáncer , sino que también es útil en la investigación médica . Células de fijación

Las células deben ser fijados para mantener la estabilidad de las proteínas intracelulares. Un número de agentes de fijación se puede utilizar tal como formaldehído o acetona enfriada con hielo . Después de la fijación , la membrana de la célula necesita ser permealized para permitir que el anticuerpo entre en la célula . Los detergentes tales como Triton o NP- 40 , o el helado de metanol se puede utilizar para hacer agujeros en la membrana de la célula .
Tinción

Lavar las células en el tampón de bloqueo 0,5 por ciento de albúmina de suero bovino diluido en solución salina tamponada con fosfato , BSA /PBS . Las células se incubaron en tampón de bloqueo para reducir la unión no específica . Añadir anticuerpo primario diluido en tampón de bloqueo y dejar en incubación a temperatura ambiente , para la longitud de tiempo optimizado . Lavar con tampón de bloqueo.
Análisis

incuba el anticuerpo secundario , que está marcado con una etiqueta fluorescente, a temperatura ambiente durante 30 minutos. Para eliminar las células de lavado de anticuerpos no unidos en tampón de bloqueo . Haga girar las células en un pellet y resuspender en PBS y analizar el citómetro de flujo.