La electroforesis en gel es un método de separación, identificación y caracterización de mezclas de proteínas o ácidos nucleicos. Muestras desnaturalizadas emigrar después de la aplicación de la electricidad en un gel delgado, húmedo normalmente hecha de poliacrilamida o agarosa. Las muestras separadas se tiñen para que puedan ser vistos. La electroforesis en gel se utiliza en la investigación de proteínas y ácido nucleico y en los hospitales para identificar las proteínas inusuales o patrones de ADN para diagnosticar enfermedades, defectos genéticos y las relaciones genéticas. Preparación de la muestra

Cuando se añade un detergente tal como dodecilsulfonato sódico (SDS) a una proteína o ácido nucleico, el detergente se asociará con y despliegue (desnaturalizado), las proteínas y ácidos nucleicos. La desnaturalización de proteínas hace que sea más fácil para determinar su peso molecular en la electroforesis. La cantidad de muestra necesaria es típicamente 100 a 500 nanogramos por la banda de la muestra de proteínas y 5 a 100 ng por banda de ácidos nucleicos en un volumen total de alrededor de 25 a 40 microlitros.
Geles

un gel, típicamente hecho de poliacrilamida o de agarosa, se puede preparar o comprados para separar estas proteínas. El gel es muy parecido a la gelatina. Es sobre todo el agua, pero es lo suficientemente sólido como para manejar. Los geles contienen tampón para controlar el pH. El gel es muy delgada (1 a 2 mm) y rectangulares. Un lado se parece a un peine con una gran cantidad de dientes perdidos. Los huecos se llaman pozos.
Muestra Cargando

Uno coloca el gel en una cámara con tampón y las proteínas desnaturalizadas se añaden a los pocillos. Las muestras de pesos moleculares conocidos se añaden a los pocillos exteriores. Los geles se realizaron con cantidades variables de poliacrilamida. Una baja resistencia de gel (4 por ciento) es mejor para la separación de moléculas de alto peso molecular, mientras que una mayor resistencia de gel (12 por ciento) se utiliza para moléculas de peso molecular superior. Un gel de gradiente varía en fuerza de gel y se puede separar de una amplia gama de proteínas con la pérdida de alguna resolución.
Electromigración

Con la aplicación de una tensión eléctrica de alta, las proteínas desnaturalizadas se mueven hacia la parte inferior del pozo. Cuanto mayor sea el peso de la proteína, más lento se mueve. Cuando la luz se apaga, las proteínas se detienen. Se saca el gel de la cámara y de las rocas en un plato con tinte. Colorantes orgánicos tales como azul Coomassie o tintes de metal se utilizan para teñir las proteínas, mientras que los tintes fluorescentes tales como bromuro de etidio se utilizan para los ácidos nucleicos.
Análisis de Resultados

Con el eliminación del exceso de mancha, se puede ver que las mezclas se separan en grupos que se parecen a las escaleras. La posición de las bandas se compara con la distancia recorrida por los estándares para determinar el peso molecular de la muestra en cada banda. El gel se puede deshidratar con alcohol y secado para que pueda ser salvado. La intensidad del color de la banda se puede medir para determinar la concentración de la proteína en cada banda.
Protocolo de Desarrollo
protocolos estándar

están disponibles para trabajar con bien proteínas conocida. Si un investigador está trabajando con una muestra desconocida, la resistencia del gel, tipo de tampón, pH, tensión, tiempo de ejecución, y la tinción puede todos tenemos que ser optimizado para obtener el mejor separación y señal.
Protocolos