La biotinilación Protocolos
Para enlazar biotina a las proteínas de anticuerpos producen cuando un antígeno entra en el cuerpo, los técnicos utilizar bicarbonato de sodio (NaHC03) a pH 9; sulfóxido de dimetilo (DMSO);
NHS -biotina y una sustancia llamada solución salina PBS. Las muestras se mezclan con bicarbonato de sodio, que más tarde se añade a NHS-biotina en DMSO. La solución se añade a continuación a los anticuerpos analizados y se incubó en una pieza de equipo llamado un rotador durante cuatro horas a temperatura ambiente o durante la noche a 39,2 grados Fahrenheit. Por último, la solución se diluye con PBS.
Superficie Celular biotinilación
En el protocolo de biotinilación superficie de la célula, los técnicos utilizan cultivo de tejidos, salina tamponada con fosfato (PBS) a pH 7,4 y 2 sulfosuccinimidil-etil-1-solución (biotinamido) ,3-ditiopropionato tampón para equilibrar la acidez que contiene grupos amino y TrisCl, de acuerdo con Current Protocols in Protein Science.The células se mezclan con la biotina y la solución tampón, se decantaron y se centrifugaron . Contenido de materiales sólidos y proteínas específicas se analizan más adelante en una placa de electroforesis en gel.
Biotinilación de péptidos
Para realizar la biotinilación de péptidos, el reactivo utilizado es el NHS SS-biotina, según Philip Shepherd "Anticuerpos monoclonales: Un enfoque práctico." Los péptidos son fragmentos cortos de aminoácidos, las moléculas que forman las proteínas y el ADN. En este protocolo, la solución comercial NHS-Biotina SS se disuelve en agua. A continuación, se añade la muestra péptido a la misma, junto con bicarbonato de sodio para equilibrar la acidez o el pH. La solución se incuba a continuación en hielo durante dos horas. Los técnicos pueden observar la muestra, con o sin las moléculas de biotina.