Un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) implica la reacción de un complejo anticuerpo-enzima con un antígeno o anticuerpo inmovilizar sobre una superficie sólida. En la incubación de la enzima conjugada con un sustrato adecuado, se forma un producto. La formación de un producto ayuda a detectar la presencia de antígeno o anticuerpo y su cantidad proporciona una medida de la cantidad de reacción antígeno-anticuerpo que se produjo. La prueba de ELISA puede realizarse de dos formas: directa e indirecta. Prueba Formato

En la prueba ELISA directa, un anticuerpo primario se lleva a cabo en las paredes de una placa de microtitulación. Cuando la muestra sospechosa de contener el antígeno se añade, hay una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzima que es capaz de reaccionar con el antígeno. Si el antígeno está presente en la muestra, se une a este anticuerpo ligado a enzimas. Cuando se añade un sustrato incoloro, si se desarrolla un color, que indica la presencia del antígeno. En el ELISA indirecto, el antígeno se mantiene en las paredes de la placa de microtitulación. Cuando una muestra sospechosa de contener anticuerpos se añade, se produce una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzima capaz de reaccionar con la región del anticuerpo no unido. Cuando se añade el sustrato incoloro, que conduce al desarrollo de color si la muestra utilizada contiene anticuerpos.
Facilidad de Prueba

Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados son comercialmente disponible. Además, es posible crear varios anticuerpos primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo secundario para la detección. Esto hace que el ELISA indirecto fácil de realizar. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios tienen que estar preparados específicamente para reaccionar con el antígeno específico sospeche que están presentes en la muestra. Esto hace que el ELISA directo desventajosa en comparación con la prueba indirecta.
Rapidez de Prueba

La prueba ELISA directa es rápida en comparación con la prueba indirecta, ya que utiliza sólo un único anticuerpo. El ELISA indirecto requiere un paso adicional de incubación con un segundo anticuerpo en el ensayo, lo que provoca un retraso en la obtención de resultados.
Sensibilidad

La prueba ELISA directa es menos sensible que la forma indirecta de la prueba debido a que es mucho menos amplificación de la señal. Además, el etiquetado del anticuerpo primario con una enzima puede afectar a su perfil de immonoreactivity. En el caso del ELISA indirecto, el anticuerpo primario no está marcado y por lo tanto, conserva su inmunorreactividad. Además, cada anticuerpo primario tiene muchos epítopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario, lo que permite la amplificación de la señal, la mejora de la sensibilidad del método. Sin embargo, existe la posibilidad de reactividad cruzada entre el antígeno y el anticuerpo secundario, que conduce a un error en los resultados. No existe tal posibilidad en el método ELISA directo.