En los primeros días de la biología molecular , los científicos utilizan comúnmente mapeo de restricción para comprender los genes que estaban estudiando . En los laboratorios de investigación modernos , mapeo de restricción se ha quedado obsoleto en gran parte porque la secuenciación se ha convertido en más accesible y más económico que en el pasado. Sin embargo , hay casos en los que un mapa de restricción puede ser adecuada para un investigador para llevar a cabo sus investigaciones . El enfoque general de la cartografía de restricción implica el uso de enzimas digestivas para romper físicamente una muestra de ADN. Una vez que se miden los productos de esta digestión , puede " volver a montar " las piezas y deducir la secuencia original de ADN. Cosas que necesitará
enzimas de restricción
ADN Muestra
solución Buffer
hielo y baño de agua caliente
Gel equipo de electroforesis
Mostrar Más instrucciones
ADN Digestión
Matemáticas 1

Añadir una enzima de restricción para su muestra de ADN . Utilice EcoR1 , una enzima comúnmente utilizado , por ejemplo .
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Añadir esta mezcla a una solución tampón , que es esencialmente un lugar para que ocurra la reacción
3 .

Elevar la temperatura de la reacción, como se indica en el manual de New England Biolabs . Cada enzima de restricción tiene una temperatura de reacción específica a la que funciona mejor . Además , cada enzima tiene una secuencia de nucleótidos específica que está diseñado para atacar . EcoRI escaneará y cortar el ADN en la secuencia de nucleótidos CAATTC . Esta orden exacto de nucleótidos debe existir para la enzima de atar y cortar el ADN . Hasta este punto , todos los materiales deben mantenerse en hielo para evitar que la actividad no deseada .
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Después de permitir que se produzca la reacción , como se indica en el manual de gestión de la mezcla en una máquina de electroforesis en gel para separar el ADN fragmentos basan en el tamaño . Los fragmentos más pequeños se moverán más lejos a través del gel .
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Medir la distancia recorrida por cada fragmento de ADN . Estos cinco pasos se deben repetir con varias enzimas diferentes por separado.
Construir el mapa de restricción
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Utilizando los datos obtenidos a partir del gel , recopilar toda la información que haya encontrado usando las enzimas de restricción diferentes .
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Deducir el orden de los sitios de restricción mediante la comparación de las diferentes longitudes de los fragmentos producidos por cada enzima . Por ejemplo, si la enzima # 1 produce dos fragmentos de la misma longitud y enzimas # 2 produce tres fragmentos de la misma longitud , se puede deducir que la enzima # 1 cortes a mitad de camino a través del ADN y la enzima # 2 corta el ADN en tercios.

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Uso de las conclusiones extraídas en el paso 2 , montamos el orden de los sitios de restricción para el ADN .