TPA purificación Protocolos

activador de plasminógeno de tejido o TPA es un tipo de serina proteasa , que es la proteína capaz de destruir coágulos de sangre . TPA se encuentra en las células que cubren internamente los vasos sanguíneos . Protocolos de ATR son parte de la investigación farmacéutica y médica en accidentes cerebrovasculares , así como enfermedades cardíacas y pulmonares , tales como embolia pulmonar e infarto de miocardio . Purificación de TPA se refiere al aislamiento de esta proteína a partir de otras moléculas a través de una serie de procesos , incluyendo la cromatografía y electroforesis . La purificación del TPA a partir de riñón de cerdo

Este protocolo se utiliza en los estudios de la fibrinólisis , el proceso de romper el producto de la coagulación llamada fibrina , relacionada con la formación de tumores . Los técnicos extraen TPA a partir de acetona - seca cerdo riñón con tampón de acetato de potasio , a un pH de 4,2 . A continuación , se añaden sulfato de amonio para inducir la precipitación de células . Añaden n-butil - sefarosa a las muestras , que luego se analizaron en un cromatógrafo . Concanavalina A también se agrega y chromatograph.y para separar diferentes proteínas se lleva a cabo .
Purificación del TPA de ovario de hámster chino y E. coli células

pureza proteína es un factor importante en el éxito de los experimentos biológicos . TPA purificado también está disponible comercialmente , ahorrando así tiempo y evitando el riesgo de poner en peligro el experimento debido a la solución purificada mal . Este protocolo implica los procesos de purificación de TPA en mamífero y células bacterianas . Los técnicos precipitan muestras de células , filtrado ellos y realizan afinidad y análisis de cromatografía de gel. Más tarde, se analizan y comparan los resultados , antes de la producción comercial.
Expresión de activo TPA humano en E. coli

lisados ​​celulares clarificados se agregan a una lisina - Sepharose , se analizaron en un cromatógrafo y se lavó con una solución de cloruro de sodio . Otra muestra se cargó en una columna de cromatografía de segundos que contiene proteínas que se une a TPA con una afinidad muy alta . Una muestra de la segunda columna se mezcla con una solución de zinc - sefarosa . La proteína resultante muestra que más del 90 por ciento de pureza , de acuerdo con la revista "Applied and Environmental Microbiology . "