NBT o nitro azul tetrazolio es un compuesto químico utilizado en la bioquímica y la inmunología para la detección de la enzima fosfatasa alcalina . La sustancia también se usa en la prueba de diagnóstico de la enfermedad granulomatosa crónica , que afecta a las células de inmunodefensa . Protocolos de ensayo NBT incluyen inmunotransferencia , solución de sustrato de fosfatasa alcalina BCIP /NBT y la detección de galactosidasa y fosfatasa alcalina actividades en el tejido . Immunoblotting

inmunotransferencia es una técnica utilizada para la detección de anticuerpos , que son proteínas que participan en el proceso inmunodefensa , dice Susan R. Haynes en " protocolos de interacción RNA - proteína. " Esto incluye el uso de NBT , así como albúmina de suero bovino , anticuerpos primarios 9E10 , solución de tinción de Comassie , membranas de nitrocelulosa , solución tampón Tris base , de amonio , sulfato de dodecil - sulfato de sodio por y butanol saturado de agua .

BCIP /NBT fosfatasa alcalina solución de sustrato

Técnicos preparar una solución con tres gotas de 1 por ciento de fosfato de 5 - bromo - 4 - cloro - 3 - indolilo ( BCIP ) , tres gotas de 1,5 por ciento NBT , dos gotas de la sustancia química Levamisol y tampón de fosfatasa alcalina ( AP ) a un pH de 9,5 , de acuerdo con el sitio web de IHC Mundial . La solución se incuba a temperatura ambiente y disponible para su uso.
Detección de galactosidasa y fosfatasa alcalina Actividades en tejido

Galactosidasas son enzimas que pueden romper el molécula de galactósido , presente en las bacterias Escherichia coli y otros organismos . De acuerdo con el Protocolo en línea, durante este protocolo, los biólogos utilizan muestras de células de ratas tratadas con solución de PBS , glutaraldehído y paraformaldyde . A continuación , se preparan el tampón de reacción bromo - cloro - indolil - galactopiranósido o X - gal para las muestras , usando ferrocianuro de potasio , cloruro de magnesio , desoxicolato de sodio y el detergente Nonidet P - 40 . Los técnicos pueden usar nitro azul tetrazolio (NBT ) en lugar de ferrocianuro de potasio como una alternativa más rápida . Las muestras de células son posteriormente observaron bajo microscopio.