¿Cómo se alinean de ADN para análisis

? Electroforesis en gel de agarosa es el método más común de análisis de fragmentos de ADN visual, que permite a los técnicos de los fragmentos de ADN visualmente discernir en función del tamaño . El gel de agarosa sostiene un campo magnético y , ya que el ADN tiene una carga negativa , se mueve hacia el extremo positivo del campo magnético . Fragmentos de ADN más pequeñas se mueven más rápidamente a través del gel y los fragmentos más grandes se mueven más lentamente . Fragmentos de ADN se tiñeron con fluorescencia con un agente intercalante conocido como bromuro de etidio . Esto permite la comparación de varias muestras de ADN a electroforesis en un gel . Cosas que necesitará en gel de agarosa
, un 0,7 por ciento a 2 por ciento
Tris - borato -EDTA (TBA ), tris -acetato- EDTA (TAE ), acetato de sodio, litio ( LA) , el ácido bórico tampón ( SB) colorante de carga
El bromuro de etidio
Gel
bandeja Gel
cámara de electroforesis
Guantes
Gafas de protección
pipeta
Electroforesis peine
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Preparar un matraz cónico de 0,7 por ciento en gel de agarosa Matemáticas 1

Pesar 0,7 gramos de polvo de agarosa y luego se coloca en un grande ( 250 ml ) .
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Añadir 100ml de un tampón 1X ( fuerza regular) (TAE , TBE , SB o tampón LB) al matraz cónico que contiene el polvo de agarosa.
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microondas o calor utilizando un mechero Bunsen durante aproximadamente un minutos hasta que la solución se vuelva clara y la agarosa se ​​disuelva.
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Retirar el matraz de la fuente de calor y deje que se enfríe a 55 a 60 grados Celsius.
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Añadir 1 l ( microlitros ) de bromuro de etidio para la solución de agarosa enfriada utilizando una pipeta de tamaño apropiado , por lo general de 1 ml . Agitar la solución a mezclar.
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Verter lentamente el gel en la bandeja de gel , asegurándose de que no hay formación de burbujas durante este proceso . Si no hay presas suministradas bien con la bandeja de gel, utilice cinta adhesiva para formarlos .
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Coloque un peine cuidadosamente electroforesis en el gel , lo que garantiza una posición firme y en la orientación correcta . Electroforesis peines pueden variar en gran medida en el número de dientes que tienen. Deje que el gel se seque durante aproximadamente 25 minutos
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Sumergir el gel en el mismo tampón utilizado para preparar la solución agaorse - . En este caso , un tampón 1X . Sumergir el gel en un máximo de 5 ml de tampón .
Preparación y carga de ADN en el gel de agarosa para el Análisis de
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transmitir de 5 a 10 l de su muestra ( s ) de sus tubos de reacción a tubos nuevos . En el caso de que usted desea utilizar toda la mezcla de reacción, un tubo nuevo no es necesario.
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Añadir tampón de carga de 0,2 X a cada uno de los tubos de muestras frescas que contienen su muestra de ADN para la carga.
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Quite el peine electroforesis lentamente , asegurándose de que no romper el gel o crear cualquier espacio entre la parte inferior del gel y la bandeja de gel.
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Añadir cinco a 12 l de un marcador de ADN apropiada a la primera así creado por el peine de electroforesis . Sea o no un marcador de ADN es apropiado depende del tamaño de los fragmentos que se espera de su muestra.
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carga cinco a 10 l de las muestras en los pocillos restantes y añadir un igual cantidad de la misma marcador de ADN en el pocillo final .
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colocar los electrodos en la cámara de electroforesis conectando los cables en las tomas correctas en la cámara y ajustar el electrodo de 50 a 150 V.
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Deje que el gel se ejecute durante una a cuatro horas .
análisis de los resultados
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Retire el gel de la cámara de gel y fijarlo en una habitación UV para la identificación visual, o un lugar en una máquina que es capaz de tomar una fotografía del gel.
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Mida la distancia marcadores de la migración en sus pozos.
Foto 18

trazar las distancias con respecto al tamaño de las bandas en el papel semilogarítmico y dibujar una línea de mejor ajuste .
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Calcule las distancias de tus bandas desconocidas .

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estimar el tamaño de sus bandas desconocidas al trazar una línea a partir de la distancia recorrida por las bandas desconocidas que cumpla con la línea de mejor ajuste .
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Dibuje otra línea a partir de este punto de encuentro hacia el eje de tamaño.