Se encuentra en algunas bacterias y especies de levaduras , los plásmidos son relativamente pequeñas, anillos auto-replicantes de ADN ubicadas fuera del cromosoma principal de una célula. Ellos son de gran utilidad en la ingeniería genética , ya que es relativamente fácil de empalmar genes seleccionados de otras especies en plásmidos , transferirlos entre células huésped de la misma o diferentes especies , y estimular a replican - o propagan - en mucho más alta de lo - normales - o amplificados - tarifas . Los plásmidos recombinantes son simplemente aquellos que se han diseñado para contener genes de otras especies . Especialmente con la propagación amplificado , los plásmidos recombinantes pueden más rápidamente y fácilmente expresar proteínas deseada a gran escala , industrial . Cosas que necesitará
plásmidos y genes bibliotecas preexistentes , o plásmidos y genes que han aislado a sí mismo de sus organismos huéspedes y empalmados Equipos Cultivo celular
agente de amplificación ( s ), tales como cloruro de calcio, una descarga eléctrica , , cloranfenicol , descargas eléctricas frío y calor, y /o la enzima Taq polimerasa de
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Elegir el procedimiento de amplificación o procedimientos que mejor se adapte a su plásmido recombinante específica y de acogida organismo. Algunos procedimientos funcionan mejor con ciertos plásmidos y los ejércitos que con otros. Si está trabajando con una novela, plásmido recombinante aún experimental y /o están probando una especie huésped diferentes , puede que tenga que determinar el mejor proceso o procesos de amplificación a través de ensayo y error.
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Pruebe el proceso denominado transformación si sus especies de plásmidos y de la célula huésped específicas podrían responder a la misma. Enfríe las células y los plásmidos a cero grados C en una solución de cloruro de calcio ( de CaCl ) . Elevar rápidamente la temperatura a 37-43 grados C. Este cambio brusco de temperatura provoca que las membranas celulares para ocupan grandes cantidades de plásmido.
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Enviar pulsos de alta tensión a través de la solución de plásmidos y células si la electroporación es el método de amplificación deseada . Esta técnica aumenta la permeabilidad de la membrana celular de los plásmidos .
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Exponer el cultivo de células huésped a niveles bajos de la cloranfenicol antibiótico para generar tantos como cien plásmidos por célula . Este método suprime la replicación de los principales cromosomas de las células huésped ' , mientras que la inducción de la replicación no controlada del plásmido , incluyendo el gen cortado y empalmado en ella .
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Aplicar la reacción en cadena de la polimerasa o método de PCR para generar copias de plásmido en muy altas órdenes de magnitud . La PCR se basa en la polimerización de ADN , la reacción química a través del cual las secuencias genéticas se forman en la naturaleza. PCR es más a menudo catalizada por una enzima termoestable llamada Taq polimerasa , extraído de una especie bacteriana que vive en las aguas termales .