biotinilación utiliza la capacidad de la vitamina biotina soluble para unirse a las proteínas celulares . La biotina se une a la proteína estreptavidina y es , por lo tanto , útil en biología celular para visualizar las proteínas celulares . La biotinilación permite el etiquetado de seguridad de las proteínas en comparación con técnicas como la radiactividad y no afecta a la función normal de la célula. Se permite a los investigadores estudiar proteínas celulares tales como receptores , y que permite una mayor comprensión de enfermedades y procesos de la enfermedad . Etiquetado suspendido Células

Lavar las células en fosfato enfriada con hielo de solución salina tamponada (PBS ) para eliminar los contaminantes . Los tampones contienen tris y glicina competirán con biotinylation y deben evitarse . Para evitar biotinilar proteínas internas , el etiquetado puede llevarse a cabo a 4 grados Celsius o en presencia de azida . Resuspender las células en PBS y la biotina soluble, sulfo -NHS -LC- biotina.

Células adherentes Etiquetado

Lavar las células en PBS y se incuban con un producto como sulfo - NHS - LC - biotina . Las células se rasparon en un plato y se lisaron en un tampón que contiene el detergente Triton X - 100 y se prepararon para la visualización .
Preparación de células marcadas

Siguiendo de incubación , las células se centrifugan en un gránulo y se lavó en PBS . Las células se resuspendieron en PBS y se purificaron con gel de la IgG sefarosa . La proteína unida se diluye en tampón de carga y se calienta a 100 grados Celsius .
Visualización de células

proteínas diluidas pueden ser visualizados utilizando dodecil sulfato de sodio electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS - PAGE) seguido por transferencia con la proteína y mezcla de enzimas , peróxido de estreptavidina - rábano picante . Las transferencias se visualizan con una reacción química --- quimioluminiscencia --- que emite luz . La especificidad de la biotinilación se puede confirmar con anticuerpos para la proteína en estudio.