Consejos de cultivo de tejidos
Algunas células se adhieren a la parte inferior de placas de Petri o permanecen en suspensión en el líquido. Las células pueden ser de origen vegetal o animal . Las células utilizadas en cultivos de tejidos pueden ser células primarias , lo que significa que se recogieron directamente de un organismo, o de una línea celular que se ha mantenido en cultivo. Las líneas celulares son a menudo las células del cáncer , y esto debe ser considerado en la planificación o la interpretación de los experimentos .
Tratar las células suavemente
células adherentes son retirados de su placa de Petri para el paso por raspado o con una proteasa , en general, la tripsina y EDTA . Raspar mata muchas células y sólo debe utilizarse en la preparación de los lisados celulares (preparaciones líquidas de contenido de la celda para el análisis ) o cuando tripsina /EDTA absolutamente debe ser evitado.
Trypsinizing elimina no sólo las proteínas que se adhieren las células para el plato pero la mayoría de otras proteínas en la membrana de la célula , también . Las células pelota hacia arriba y tomar un poco de tiempo, generalmente durante la noche , para restablecer un vínculo con el plato. Adición de una cantidad mínima de tripsina - alrededor de 1 ml para un matraz de 25cm2 - mecedora el matraz durante cinco segundos o menos para recubrir la monocapa y luego vertiendo o aspirar el exceso de tripsina reducirá la cantidad de tripsina al que se expone la monocapa . Deje que las células se apoyan en la incubadora durante tripsinización .
Vez que las células se deslizan fuera de la parte inferior del plato, añadir medio con suero y aspirar el lisado de arriba a abajo la pipeta suavemente . Permitir un poco de los medios de comunicación permanezcan en el plato a medida que pipetear hacia arriba y hacia abajo varias veces para separar las matas y obtener una suspensión uniforme .
No chupan burbujas en la pipeta . Asimismo, no mezcle o agite vigorosamente la suspensión celular; las células son muy frágiles en este estado balled -up .
Para Heat inactivar o no calentar Desactivar
Cuando las técnicas de cultivo de células estaban en su infancia , suero bovino fetal (FBS ) se sabe que contiene proteínas del complemento , que son proteínas del sistema inmunitario que las células se lisan . Las proteínas del complemento no son deseables en el cultivo celular . FBS al calor que inactiva a 56 grados centígrados durante 30 minutos harán que las proteínas del complemento inactivos. Precalentamiento del FBS a 37 grados C es también suficiente para inactivar las proteínas del complemento .
En los primeros días , el calor inactivación de FBS también mató micoplasmas y otros contaminantes. En el momento , la esterilización de filtro se realizó con filtros 0.45um . Hoy en día, vamos a filtrar esterilizar SFB y los medios de comunicación a través de 0.1um o filtros incluso 0.04um . No micoplasma se deslizará a través de ese
Esto nos deja la cuestión de si o no se caliente inactivate inactivación
calor degrada todos los componentes de las FBS - . . Tales como las vitaminas , los aminoácidos y factores de crecimiento - . posiblemente por debajo del umbral de algunas líneas celulares melindrosos
Si está trabajando con una línea de células de crecimiento lento o quisquillosos , considere simplemente filtrar esterilizar sus FBS . Usted puede encontrar esto aumenta la robustez de sus células.