Protocolos infección por retrovirus

Contiene un genoma de ARN que está encapsulado en una cápside y envoltura lipídica , los retrovirus contienen cadenas polipeptídicas que ayudan a enlazar a los receptores en las membranas de las células huésped que infectan. Considerando que la información hereditaria mayoría de las células ' se codifica en el ADN, la de los retrovirus está contenida en el ARN; retrovirus también llevan la enzima transcriptasa inversa , lo que les permite adherirse a la ADN del huésped . Ciertos protocolos son seguidos por los laboratorios de la infección con propósito de la célula de ADN con estos virus . Preparación del Laboratorio

Cierto equipo y suministros de laboratorio son necesarios para ayudar en el proceso de la infección retroviral. El equipo incluye 1 ayuda de la pipeta , 1 pipeta -man , 1 campana de cultivo de tejidos , de 37 grados centígrados y las incubadoras Celsius 32 grados , y una centrífuga Eppendorf . Los suministros incluyen placas de cultivo de tejidos , una pipeta Pasteur desechable , sobrenadante retroviral cualificado , polibreno esterilizada por filtración y sulfato de protamina , esterilizada por filtración .
Preparación de la célula para la infección

Prior a la infección , las células de destino deben ser divididos en una placa de cultivo de tejidos y se incubaron durante la noche en una incubadora de 37 grados centígrados con un cinco por ciento de CO2. El propósito del período de incubación es crear células que son 50 % de confluencia . Preparación de las células de antemano es necesario asegurarse de que las células están optimizados para el proceso de infección . El Laboratorio de Nolan en la Universidad de Stanford recomienda que la infección de células comienzan siempre comienzo al infectar las células NIH 3T3 para ayudar a optimizar los resultados de la prueba.
Infectar las células

Después del período de incubación es largo , los investigadores deben asegurarse de que las células son sanos y de la confluencia derecha. El uso de la campana de cultivo de tejidos , la materia celular se aspiró y un sobrenadante viral se aplica a las células . Una vez aplicado, la placa debe ser meció suavemente hacia adelante y hacia atrás para asegurarse de que se distribuya uniformemente. Las células deben entonces ser spin- inoculado por su inclusión en la centrífuga de Eppendorf y haciéndolos girar a 2.500 rpm durante noventa minutos a una temperatura de 30 grados Celsius . Después, las células deben ser incubadas a 32 grados centígrados durante uno o dos días. El virus se reemplaza luego con las células extraídas y se coloca en la incubadora para ser analizados en cualquier lugar de tres a siete días después de la infección inicial.