Protocolo de congelación celular

Preservar las células a través de la congelación es fundamental para la investigación , la medicina veterinaria y la cría de animales , ya que permite a las células para ser almacenados por largos períodos de tiempo. El método de congelación seleccionado , sin embargo , debe reducir o prevenir el daño a la célula . El agente de criopreservación y el método pueden depender del tipo de célula . Preparación

Las células deben ser congeladas cuando están saludables y en crecimiento activo con una viabilidad del 90 por ciento . Se debe tener cuidado en el manejo y la centrifugación de alta velocidad y pipeteo vigoroso o aspiración se debe evitar para mantener la viabilidad y prevenir el daño celular.
Crioprotección

Un agente crioprotector es utilizado como un reemplazo para el agua intracelular . El agente evita que los cristales de hielo y la deshidratación que ocurren en las células . Glicerol esterilizado y esterilizado dimetilsulfóxido se utilizan a menudo en una concentración de 5 por ciento a 15 por ciento ( volumen por volumen ) diluido en cualquiera de suero de ternera fetal o medio de crecimiento , dependiendo del tipo de célula .
De congelación y Almacenaje

las células en la mezcla de congelación deben enfriarse lentamente. Si un congelador programable no está disponible , crioviales se pueden envolver en el tejido o colocados en espuma de poliestireno , lo que puede ralentizar el proceso de congelación . Las células deben mantenerse a menos 80 grados centígrados durante 24 horas y luego se transfieren a nitrógeno líquido para su almacenamiento a largo plazo .

Descongelación

células congeladas deben descongelarse rápidamente. Un baño de agua a 37 grados Celsius puede ser utilizado . Se debe tener cuidado con las células almacenadas en nitrógeno líquido, sin embargo, como el nitrógeno líquido puede entrar en los viales y puede explotar en la descongelación. La mezcla de congelación debe ser diluido en medio de cultivo . La viabilidad celular se debe evaluar con el colorante azul de tripano y las células cultivadas como normal.