¿Qué es la electroforesis en gel de

? La electroforesis en gel es un método de separación , identificación y caracterización de mezclas de proteínas o ácidos nucleicos . Muestras desnaturalizadas emigran después de la aplicación de la electricidad en un gel delgado, húmedo típicamente hecha de poliacrilamida o agarosa. Las muestras separadas se tiñen para que puedan ser vistos . La electroforesis en gel se utiliza en la investigación de proteínas y ácido nucleico y en los hospitales para identificar las proteínas inusuales o patrones de ADN para diagnosticar enfermedades , defectos genéticos y relaciones genéticas . Preparación de la muestra

Cuando se añade un detergente tal como dodecilsulfonato de sodio (SDS ) a una proteína o ácido nucleico , el detergente se asociará con y desplegar proteínas ( desnaturalizadas ) y ácido nucleico . La desnaturalización de proteínas hace que sea más fácil para determinar su peso molecular en la electroforesis . La cantidad de muestra requerido es típicamente de 100 a 500 nanogramos por banda de muestra para las proteínas y de 5 a 100 ng por banda para los ácidos nucleicos en un volumen total de alrededor de 25 a 40 microlitros .
Geles

gel, normalmente hecha de poliacrilamida o agarosa , se pueden preparar o comprado para separar estas proteínas. El gel es muy parecido a la gelatina. Es sobre todo el agua, pero es lo suficientemente sólido como para manejar . Los geles contienen tampón para controlar el pH . El gel es muy delgada ( 1 a 2 mm ) y rectangular . Un lado se parece a un peine con una gran cantidad de dientes perdidos . Las brechas son llamados pozos.
La carga de muestras

Uno coloca el gel en una cámara con tampón y las proteínas desnaturalizadas se añaden a los pocillos. Las muestras de pesos moleculares conocidos se añaden a los pocillos exteriores. Los geles se realizaron con cantidades variables de poliacrilamida . Una resistencia de gel baja ( 4 por ciento ) es mejor para la separación de moléculas de alto peso molecular , mientras que una resistencia de gel más alta ( 12 por ciento ) se utiliza para moléculas de mayor peso molecular . Un gel de gradiente varía en la fuerza de gel y puede separar una amplia gama de proteínas con la pérdida de algunos resolución.
Electromigración

Con la aplicación de una alta tensión eléctrica , las proteínas desnaturalizadas se mueven hacia la parte inferior del pozo . Cuanto mayor sea el peso de la proteína , más lento se mueve . Cuando la electricidad está apagada , las proteínas dejan de moverse . Se saca el gel de la cámara y de las rocas en un plato con el tinte . Colorantes orgánicos tales como azul de Coomassie o tintes de metal se utilizan para las proteínas de manchas , mientras que los tintes fluorescentes tales como el bromuro de etidio se utilizan para los ácidos nucleicos.
Análisis de Resultados

Con el eliminación del exceso de la mancha , se puede ver que las mezclas se separan en bandas que se parecen a las escaleras . La posición de las bandas se compara con la distancia recorrida por los estándares para determinar el peso molecular de la muestra en cada banda . El gel se puede deshidratar con alcohol y se seca por lo que se puede guardar. La intensidad del color de la banda entonces se puede medir para determinar la concentración de la proteína en cada banda.
Desarrollo Protocolo

protocolos estándar están disponibles para trabajar con el bienestar proteínas conocidas . Si un investigador está trabajando con una muestra desconocida, la resistencia del gel , tipo de tampón , pH , tensión , tiempo de ejecución, y las manchas pueden ser todos necesitan ser optimizados para obtener la mejor separación y señal.
Protocolos