Perfusión Técnica

La técnica de perfusión proporciona una fijación rápida y uniforme a todas las células individuales presentes en el tejido . Un fijador de paraformaldehído al 4 por ciento se pasa a través del sistema vascular para obtener tejido de interés . El sitio diana principal para la administración del fármaco en un órgano en particular se puede identificar con la ayuda de esta técnica . Perfusión también ha ayudado a los científicos a comprender la organización estructural y funcional del cerebro humano. Cosas que necesitará
Animal ( rata o mono )
bomba de perfusión , vaso
fijador (4 por ciento paraformaldehído )
agujas de jeringa de archivo: Conjunto de goteo Perfusión
Tijeras
Bisturí
Pinzas
0,9 por ciento salina Pequeña caja de hielo de
Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Preparar fresco 4 por ciento paraformaldehído mezclando 40 g de paraformaldehido en 800 ml de agua. Calentar la solución a 60 º C mientras se agita . Enfriar la solución a 4 º C. Ajustar el pH a 9,5 con la ayuda de un medidor de pH . Para ajustar el pH , se añade ácido acético glacial para obtener el pH deseado
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Configure la bomba de perfusión; . Conectar todas las piezas de vidrio y una aguja de perfusión. Correr 100 ml de agua corriente a través de la tubería de la bomba de perfusión para eliminar cualquier residuo de los cristales . Coloque un vaso de precipitados de fijador en una caja de hielo .
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Abra el extremo del tubo de perfusión y colocarlo en un vaso de precipitados fijador. Escala el volumen de la solución de acuerdo con el tamaño del animal . Ahora ajuste la válvula de la bomba de perfusión para un goteo lento y constante . Cierre la válvula. Llene el aparato de perfusión con solución salina al 0,9 por ciento ( peso /volumen).
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Establecer los instrumentos de cirugía , cerca de la mesa de operaciones. Dar una inyección de la anestesia a los animales según su peso corporal ( ketamina 0,5 mg /kg ) . Colocar el animal sobre la mesa de operaciones , con la espalda hacia abajo.
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Haga un corte con un bisturí , a lo largo de la longitud del diafragma. Con los grandes tijeras , lado romo hacia abajo , cortar los tejidos conectivos en la parte inferior del diafragma . Exponer el corazón. Sostenga el corazón que late con las pinzas e insertar una aguja en el ventrículo izquierdo.
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Abra la válvula de la bomba de perfusión para permitir el flujo de solución salina al 0,9 por ciento. Asegúrese de que la solución fluye libremente y el animal está vivo . El corazón del animal debe ser latiendo continuamente. Una vez que la sangre se sustituye por la solución salina , cambiar la solución a 4 por ciento de paraformaldehído .
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Detener la perfusión y diseccionar un tejido de interés . Mantener el tejido en el mismo medio a 4 º C.