Protocolo PBMC

periférica de células mononucleares de sangre criopreservadas ( PBMC ) son una fuente frecuente de muestras para la investigación que incluye la inmunoterapia y las respuestas a las vacunas . Mientras que algunos protocolos se limitan al aislamiento y fases de congelación del proceso , otros incluyen los procedimientos de descongelación . Procedimiento de aislamiento y procedimiento de congelación

Un compuesto comercial para promover la separación se coloca en cada tubo de centrífuga de 50 ml y los tubos se centrifugaron durante treinta segundos . Tapas de tubos de sangre son rociados con alcohol antes de abrir, a continuación, la sangre entera tratada con anticoagulante se transfiere entonces a través de la pipeta en los tubos de centrífuga . La capa de plasma de la sangre se aspira con una pipeta .
De congelación

Las células procedentes de la etapa anterior a continuación, se centrifugaron con solución salina tamponada tres veces . Después de un recuento de células , las muestras se centrifugaron después se suspendió en medio de congelación . Los especímenes en el medio de congelación se dividen entre el próximo crioviales en una cantidad mL. Los viales se almacenaron durante la noche en una

-70 º C congelador y se mudaron a un almacenamiento a largo plazo en nitrógeno líquido al día siguiente.
Segura descongelación

crioviales se transfieren de nitrógeno líquido a una C baño de agua de 37 º y la muestra se descongelará por uno o dos minutos . Un medio de transporte de calor se añade a cada vial . Suspensión celular diluido se centrifugó durante siete minutos . El número y la viabilidad celular se comprueban , si las células necesitan para concentrarse, las muestras se centrifugan siete minutos más. La muestra se diluye con solución de trabajo y descansó durante doce a dieciocho horas antes de comenzar el examen en el protocolo especificado.