Los protocolos para la tinción Hoechst

Las manchas de Hoechst son tintes fluorescentes utilizados para el ADN y el ARN de etiquetado a través de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo técnicas . Hoechst 33258 y Hoechst 33342 son los más utilizados de estas manchas. Tienen la capacidad de unirse a moléculas de ADN , haciendo que los núcleos y mitocondrias que aparezcan fluorescente bajo luz ultravioleta . Los protocolos para la tinción de Hoechst son una práctica común en los laboratorios biotecnológicos y genéticos , e incluyen técnicas de tinción de células utilizando tanto Hoechst 33258 y Hoechst 33342 . Hoechst 33342 tinción HSC y Células Madre Protocolo Purificación

Este protocolo se utiliza para teñir las células de médula ósea de ratón . Los técnicos preparan muestra de médula ósea con solución de HBSS + sal , tampón HEPES y suero de ternera fetal . Hacen girar la solución y añadir a un medio DMEM precalentado . A continuación se añade Hoechst mancha. La solución se coloca en un baño de agua de 98.6 grados Fahrenheit durante exactamente 90 minutos , según informa el Departamento de Inmunología de la Universidad de Pittsburgh. Segmentos de ADN aparecen fluorescente bajo un citómetro .
Hoechst 33342 tinción de ADN

Durante este protocolo , los técnicos suspendidos Hoechst 33342 tinción en agua destilada , añadir un 2 por ciento de suero de ternera fetal al la muestra de células , manteniendo el pH a 7,2 con la ayuda de una solución tampón . Después las células se incubaron a 98,6 grados F durante una hora, y se analizaron inmediatamente con una pieza de equipo llamado citómetro .

ADN Stained es entonces visible y fluorescente , de acuerdo con la Universidad de Michigan Health System .


Detección de ADN Utilizando la unión al ADN fluorocromo Hoechst 33258

Este protocolos utilizan un aparato llamado espectrofotómetro para analizar los segmentos de ADN y ARN . Los técnicos utilizan Hoechst 33258 de trabajo muestras de ADN de la solución y del timo de ternero . Ellos también hacen una solución separada utilizando la muestra de ADN y un químico llamado bromuro de etidio. Más tarde, se comparan los resultados de la tinción de células en los dos medios de comunicación, el uso de un espectrofotómetro , de acuerdo con los protocolos actuales en Citometría .