Procedimientos de etiquetado de anticuerpos
ELISA o prueba de inmunoensayo ligado a enzimas , es una técnica de laboratorio biológico utilizado para detectar la presencia de un antígeno o anticuerpo . A menudo se utiliza en el diagnóstico médico para determinar si un paciente ha sido expuesto a un tipo particular de infección .
Para llevar a cabo un ELISA , la — muestra que contiene el antígeno de interés — está anclado a un soporte sólido en un plato . Una solución con el anticuerpo complementario se añade a la placa , y el anticuerpo se une al antígeno . El exceso de anticuerpo se lava a continuación , dejando sólo los pares de antígeno - anticuerpo-atado en el plato . Estos pueden ser visualizados mediante la adición de una molécula fluorescente que se une al anticuerpo y emite una señal visual , que puede ser cuantificada . De esta manera , la presencia y la cantidad del antígeno de interés se pueden determinar indirectamente .
Western Blot
Un Western blot es un tipo diferente de técnica utilizada para detectar una proteína específica en una muestra y determinar su tamaño . En primer lugar , las proteínas de la muestra están distribuidas por tamaño en un gel mediante electroforesis en gel. En este punto , las proteínas no son visibles para el ojo desnudo . Los científicos a continuación, transferir las proteínas a una membrana y añadir una solución que contiene el anticuerpo al antígeno de interés . Después de lavar el exceso de solución , el anticuerpo se une al antígeno en la membrana .
Adición de un anticuerpo secundario hace que el original , o primario , anticuerpo para emitir luz . La cuantificación de la cantidad de luz emitida permite a los investigadores para determinar la presencia del antígeno , su tamaño en comparación con otras proteínas y su concentración relativa.
Inmunohistoquímica
inmunohistoquímica es una técnica que permite a los investigadores visualizar la localización de una proteína en una muestra de tejido . Pequeños trozos de una muestra se preparan y un anticuerpo primario , que se une al antígeno de interés , se añade . El exceso de solución se elimina por lavado antes de investigadores añaden un anticuerpo secundario . Este anticuerpo se une a la par de anticuerpos antígeno- primaria y emite luz , lo que indica la localización del antígeno de interés.
Los científicos utilizan un microscopio para visualizar donde el antígeno está en la celda. Múltiples anticuerpos diferentes , cada uno específico para una proteína particular , se pueden usar para determinar la ubicación relativa de varias moléculas en una célula . Si este es el objetivo , diferentes anticuerpos secundarios de colores se utilizan para distinguir entre las diferentes moléculas de interés .
Citometría de Flujo
celular — clasificación activada por fluorescencia o FACS — es un tipo de citometría de flujo utilizado para separar diferentes tipos de células en una solución . Cada tipo de célula se "etiqueta " con un anticuerpo específico para ese tipo de célula . Cada uno de estos anticuerpos emite un color de luz diferente . Una máquina agita la solución para dividirla en gotitas individuales y utiliza un sensor para detectar el color de cada gotita . La máquina ordena las células por color emitido , dividiéndolos basado en el tipo de proteína que contienen. Metodología FACS permite a los investigadores para clasificar y cuantificar las células de interés para sus preguntas de investigación.
Inmuno- Microscopía Electrónica
microscopía electrónica normal permite a los científicos examinar la estructura de una célula ampliada hasta 1 millón de veces. Microscopía inmuno - electrónica utiliza las propiedades de anticuerpo - antígeno se unen a visualizar las proteínas particulares en secciones de tejido muy finas . En primer lugar , los anticuerpos con partículas de oro adjuntas se les permite unirse al antígeno de interés . Un microscopio electrónico a continuación, visualiza las partículas de oro , dando a los investigadores una imagen de donde la proteína se localiza en la célula .
Aunque la microscopía inmuno - electrónica es simple en teoría , es técnicamente difícil y muy costoso emplear , limitando su popularidad de su uso en muchos programas de investigación biológica .