MBP protocolos de purificación

MBP o proteína de unión a maltosa se ​​encuentra en la bacteria Escherichia coli, que es parte de la flora intestinal de los seres humanos y animales . La purificación de MBP implica una serie de procedimientos destinado a separar los componentes de la proteína . En la biología molecular , la purificación de MBP es un proceso vital para el estudio de la estructura y la función de esta proteína . Protocolos de purificación incluyen MBP MBP proteínas fusionadas purificación, a pequeña escala de fusión MBP y purificación marcador de fusión proteína de unión a maltosa. MBP Fused Proteínas Purificación

Durante este protocolo , los técnicos lavan 20 ml de la resina de amilosa de polímero con una solución de ATRIS a pH 7,4 , cloruro de sodio , mercaptoetanol ( ME ) y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA ) , de acuerdo con protocolos Online. Se añaden , se centrifugaron y se analizaron en electroforesis en gel de muestras de células. Las muestras también se analizaron en un cromatógrafo , donde los técnicos eluido, o observan constituyentes de la solución mientras se pasa a través de la columna de cromatografía .
Pequeña Escala de fusión MBP Purificación de proteínas

Según la Universidad Hebrea de Jerusalén , los biólogos utilizan el reactivo isopropil BD- 1 - tiogalactopiranósido (IPTG ) , el cultivo de células de centrifugado durante 10 minutos a 8.000 revoluciones por minuto a 39,2 grados Fahrenheit. Más tarde, eliminar el líquido sobrenadante y mezcla de tampón PBS frío a la muestra , que se divide en varios tubos y se centrifugó de nuevo. Las muestras se mantuvieron a -112 grados Fahrenheit para el análisis posterior.
Unión maltosa proteína de fusión Tag Purificación

etiquetas de afinidad están diseñados genéticamente moléculas empleadas en biología molecular para detectar y purificar proteínas . Este protocolo es un conjunto complejo de procedimientos dividido en tres etapas , que incluyen la construcción de marcador de proteína polihistidina ( HisMBP ); un experimento piloto para evaluar la solubilidad de la proteína; y la purificación a gran escala de moléculas de MBP , según la naturaleza Protocolos . Además de las muestras de E. coli , los técnicos utilizan ampicilina , kanamicina , IPTG , anhidrotetraciclina , monohidrato de glucosa , tampón de lisis celular , el ADN polimerasa , cebadores de PCR , Tris-acetato - EDTA y bromuro de etidio .