Ensayo de Placa Método

Un ensayo es una técnica utilizada para aislar y purificar los virus y para determinar los títulos virales ( la concentración más baja de virus que da como resultado la infección ) . Un ensayo de placa , originalmente llamado un ensayo virológica , se desarrolló para medir y contar la infectividad de los bacteriófagos . De acuerdo a la biología - Online.org , más tarde se aplicó también para contar virus de mamíferos . Los hechos

Una placa es una confluencia, cultivo en monocapa de células. Se forma como resultado de la infección de una de las células por una única partícula de virus , de acuerdo a la Biología - Online.org . Una vez se infecta la célula , el virus se replica y eventualmente mata a la célula . Además, las partículas de virus recién replicados propagan , infectar y matar a las células cercanas .
Función

En un ensayo de placa , la cultura se tiñe primero con un tinte particular. Este dado manchas células sólo viables ( vivos) , de acuerdo a la biología - Online.org . Como resultado , las células muertas aparecen sin teñir en la cultura , contra el fondo teñido. Actualmente, el ensayo de placa se aplica para detectar las células que producen anticuerpos que destruyen los eritrocitos por hemólisis .

Características

Los eritrocitos son células (también llamados glóbulos rojos ) que contienen un nivel de hemoglobina y el transporte de oxígeno y dióxido de carbono en la sangre , de los pulmones y los tejidos . La hemólisis se produce cuando los eritrocitos se abren y liberan hemoglobina, de acuerdo a la biología - Online.org . Como resultado , en el ensayo de placas , la placa base es clara e indica que las células rojas de la sangre han sido hemolizados por los anticuerpos .
Método Parte I

Diez diluciones de un stock de virus se preparan antes de realizar un ensayo de placa y aliquiots 0,1 ml se puso a las monocapas celulares. Esta mezcla se incuba durante un período de tiempo para que el virus tiene tiempo para atacar a las células . Además , las monocapas están cubiertos por un medio nutriente que contiene una sustancia ( por lo general de agar ) , de acuerdo con " la detección de virus : un ensayo de placa " de Vincent Racaniello . El medio nutriente forma un gel y después se incuba el cultivo, las células infectadas de lanzamiento original progenie viral . El gel de restringir la propagación del virus a las células circundantes , y como resultado , la partícula infecciosa produce una zona circular llamada una placa . Con el tiempo , la placa crece a un tamaño visible a simple vista y colorantes se utilizan para mejorar la visualización.
Método Parte II

El título del virus se calcula en unidades formadoras de placas , llamadas UFP por mililitro , formando . Se cuentan y , para reducir al mínimo error , sólo placas que contienen entre 10 y 100 placas se cuentan . Por otra parte , de acuerdo con " la detección de virus : un ensayo de placa ", por cada 100 placas contabilizados el mismo título puede variar en más o menos 10 por ciento. Por lo tanto, el error estimado de un ensayo de placa es de aproximadamente 10 por ciento , cuando se realiza correctamente .