HPLC Técnica
La técnica de HPLC contiene cuatro componentes principales. En primer lugar, el sistema de disolvente de suministro ( la fase móvil ) , que lleva las muestras a través de la columna , es importante , como la polaridad afecta a la capacidad del sistema para separar las moléculas . La columna de cromatografía es por lo general una columna vertical de vidrio que está lleno de un adsorbente . En segundo lugar, el adsorbente ( también conocida como la fase estacionaria , ya que no se mueve ) es comúnmente gel de sílice o alúmina . En tercer lugar, el sistema de introducción de muestras consta de algún tipo de puerto de inyección para introducir la muestra a analizar en el sistema de suministro de disolvente . El cuarto componente es el detector.
Detectores
El tipo de detector utilizado depende del tipo de muestra que los técnicos están funcionando y qué moléculas están tratando de aislar. Los criterios que el técnico utiliza la hora de elegir un detector de selectividad incluyen , relación señal a ruido , límite de detección , rango lineal , constante de tiempo , la deriva y el volumen de la celda . Detectores usados comúnmente incluyen detectores de ultravioleta-visible , espectrómetros de masas , los índices de refracción , detectores de fluorescencia o dispositivos de dispersión de luz por evaporación .
Procedimiento
Encienda el detector, las bombas (que se utilizan para añadir presión para mover la fase móvil a través de la fase estacionaria ) , y el equipo que va a grabar e imprimir el cromatograma . Elija los programas apropiados con el fin de recopilar los datos deseados. Inyectar la muestra en el puerto de inyección . Mantenga un ojo en la presión. Cada tipo de columna tiene una presión máxima; no exceder este o no se producirá la separación . Imprima el cromatograma y analizar los resultados . Al final de cada carrera , es importante para eliminar el puerto de inyección para evitar la acumulación , que puede crear bloqueos.
Tipos
cromatografía de interacción hidrofílica utiliza un polar en condiciones de servidumbre fase estacionaria y una fase móvil no polar miscible en agua para separar moléculas en base a la polaridad . Esta técnica tiene la capacidad de separar muestras de ácidos, básicos y neutros en una cromatografía de fase chromatogram.Normal solo utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil no polar , no acuoso para separar los isómeros estructurales (moléculas con la misma fórmula molecular que han átomos unidos juntos en diferentes maneras ) cromatografía de fase inversa . es del tipo de HPLC más ampliamente utilizado . Se utiliza una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar algo acuosa . Este método es comúnmente utilizado por las compañías farmacéuticas para calificar drogas antes de la cromatografía de exclusión release.Size separa las moléculas en base a su tamaño y también puede determinar la estructura de cromatografía de intercambio proteins.Ion se basa en la atracción entre los iones en el soluto y los sitios cargados unido en la fase estacionaria .
usos
de HPLC es útil en una variedad de aplicaciones . Se puede utilizar para analizar materiales farmacéuticos , que es útil en la investigación de nuevos productos farmacéuticos , así como la purificación de los ya existentes . También se utiliza para analizar fluidos biológicos , pesticidas , explosivos y otros materiales . Aunque es una técnica popular para la investigación biomédica , bioquímica y farmacéutica , que también se utiliza en los cosméticos, alimentos , industrias medioambientales y energéticas .