Protocolo de lisis celular para aislamiento de proteínas

proteínas pequeñas se puede preparar sintéticamente , pero por muchas razones no hay maquinaria sintética mejor que la propia célula . Típicamente , el primer paso en el aislamiento de las proteínas es la lisis celular . Lisis Celular
En la lisis celular , la membrana que rodea las rupturas celulares .

La palabra " lisis " viene de una raíz griega que significa " para aflojar . " En la lisis celular , las fuerzas que mantienen la membrana celular juntos se interrumpen , causando que se rompa . El contenido de la celda se liberan en la solución circundante , incluyendo la proteína de interés . Normalmente esto se hace mediante la adición de una solución químico llamado tampón de lisis .
Preparación de Tampón de Lisis Unidos La elección de tampón de lisis dependerá del tipo de célula , la proteína y la aplicación .

Una miríada de diferentes soluciones de lisis están disponibles comercialmente , o recetas comunes se puede utilizar para preparar tampón de lisis a partir de productos químicos comunes . La mejor tampón a utilizar variará dependiendo del tipo de célula utilizado , la proteína a ser aislado y la aplicación final , pero , en general , una solución de lisis contiene una molécula de detergente (a menudo NP - 40 o Triton - X ) que disuelve la célula membrana , junto con tampones, agentes quelantes e inhibidores de la proteasa para prevenir la proteína que se dañe una vez liberados del entorno de protección de la célula.

lisis Condiciones
Performing lisis bajo condiciones heladas evita daños a la proteína de interés.

El tampón de lisis se utiliza generalmente enfriado con hielo , y se permitió que el proceso de lisis para proceder bajo condiciones de frío . La solución se sacudió suavemente para fomentar la dispersión uniforme de las células y de los productos de lisis . Después de aproximadamente 5 a 10 minutos , la solución de lisis se neutraliza por lo general para evitar una mayor actividad . Estas precauciones reducen el daño a la proteína y reducir la cantidad de residuos producidos extraños que tendrá más tarde para ser eliminado.
Otros métodos de lisis
fuerza mecánica también puede ser utilizado para la lisis de las células .

Aunque lisis química es la más gentil y más comúnmente utilizado , los métodos mecánicos más severas para la lisis de las células se pueden usar en algunos casos. Estos incluyen ultrasonidos , los ciclos de congelación-descongelación y la homogeneización , que es un proceso de maceración . Consulte la documentación técnica para encontrar el método más adecuado para su caso específico .