Esenciales Métodos Citometría de Flujo

La citometría de flujo implica el principio de enfoque hidrodinámico , utilizando una fuente de luz de excitación tal como un láser , para medir y analizar las características físicas de las partículas individuales. La citometría de flujo se aplica predominantemente a análisis de células , y las propiedades analizadas incluyen tamaño de celda , la granularidad y la intensidad de fluorescencia . Métodos de detección Esenciales utilizados en citometría de flujo son la luz , la luz dispersada hacia adelante - dispersa - lado y de fluorescencia. Citómetro de flujo

Un citómetro de flujo es forman parte de fluidos , óptica y un sistema electrónico . El sistema de líquidos es responsable de transportar la corriente de muestra para el rayo láser para ser interrogado. El sistema óptico contiene los láseres y filtros de luz que iluminan las muestras y señales de luz directa a los detectores correspondientes. Esta luz detectada se convierte en señales electrónicas mediante el sistema electrónico , para la interpretación por el ordenador.
Luz dispersa -Forward

luz difractada dispersos en una dirección de avance se detecta aproximadamente 20 grados del eje del haz de láser por un fotodiodo llamado el canal de ida - dispersos ( FSC ) . La luz dispersada hacia adelante - es directamente proporcional al área de superficie de la partícula , y se utiliza como un indicador de tamaño de celda y para distinguir entre células vivas y muertas . Debido a estas características , el FSC se aplica a immunophenotyping como un disparador de procesamiento de señales.
Side Light

luz dispersa -Side Dispersos refiere a la luz refractada a cualquier interfaz celular , que se mide a aproximadamente 90 grados del eje del haz láser por el canal de dispersión lateral ( SSC ) , entonces redirigido al detector relevante por un divisor de haz . Luz lateral dispersa es aproximadamente equivalente a la granularidad celular o complejidad interna , y se utiliza para determinar el contenido granular de las células . Lateral y luz dispersada hacia adelante se utilizan en combinación para distinguir entre diferentes tipos de células.
Fluorescencia

fluorescencia proporciona información cuantitativa y cualitativa sobre las moléculas intracelulares tales como citoquinas y receptores de ADN , y de la superficie celular , mediante el uso de etiquetas de fluorocromo y midiendo a diferentes longitudes de onda . Cada etiqueta fluorocromo tiene una longitud de onda específica sonó a la que se absorbe la luz se llama el espectro de absorción . Funciones de fluorescencia como un fotón de luz es emitida por un electrón excitado después de la absorción de luz .