¿Cómo varía la cantidad de digestión de BAPNA con el tiempo?

La digestión de BAPNA (benzoil-DL-arginina-p-nitroanilida) por tripsina sigue la cinética enzimática típica de Michaelis-Menten. Inicialmente, la velocidad de digestión aumenta con el tiempo a medida que más moléculas de enzima participan en la reacción. Sin embargo, a medida que la concentración del sustrato disminuye con el tiempo, la velocidad de digestión se ralentiza. La relación entre la cantidad de BAPNA digerida y el tiempo se puede describir mediante la siguiente ecuación:

[BAPNA]t =[BAPNA]0 - k[E][BAPNA]0*t

Dónde:

- [BAPNA]t:Cantidad de BAPNA digerida en el momento t

- [BAPNA]0:Concentración inicial de BAPNA

- k:Constante de velocidad de la reacción

- [E]:Concentración de tripsina

-t:tiempo

La gráfica de [BAPNA]t versus t típicamente muestra una curva hiperbólica. La fase lineal inicial de la curva representa el período en el que la velocidad de reacción es constante y proporcional a la concentración de enzima. A medida que avanza la reacción, la curva se estabiliza debido al agotamiento del sustrato y la disminución de la velocidad de digestión.

Al medir la velocidad inicial (Vo) de la reacción y determinar la constante de Michaelis-Menten (Km) mediante análisis gráfico (por ejemplo, diagramas de Lineweaver-Burk o Hanes-Woolf), es posible caracterizar la cinética de la enzima y obtener información sobre la reacción catalítica. Eficiencia y afinidad de sustrato de tripsina por BAPNA.