Diferencia entre directa e indirecta ELISA

Una prueba de inmunoensayo ligado a enzimas ( ELISA) implica la reacción de un complejo anticuerpo-enzima con un antígeno o anticuerpo celebrada inmóvil sobre una superficie sólida . En la incubación de la enzima conjugado con un sustrato adecuado , se forma un producto . La formación de un producto ayuda a detectar la presencia de antígeno o anticuerpo y su cantidad proporciona una medida de la cantidad de reacción antígeno-anticuerpo que se produjo . La prueba ELISA puede realizarse de dos formas : directa e indirecta . Formato Prueba

En la prueba ELISA directa, un anticuerpo primario se mantiene en las paredes de una placa de microtitulación . Cuando se añade la muestra sospechosa de contener el antígeno , hay una reacción antígeno-anticuerpo . A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzima que es capaz de reaccionar con el antígeno . Si el antígeno está presente en la muestra , se une a este anticuerpo ligado a enzima . Cuando se añade un sustrato incoloro , si se desarrolla un color , que indica la presencia del antígeno . En el ELISA indirecto , el antígeno se mantiene en las paredes de la placa de microtitulación . Cuando se añade una muestra sospechosa de contener anticuerpos , una reacción antígeno-anticuerpo se produce . A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzima capaz de reaccionar con la región no unido del anticuerpo . Cuando se añade el sustrato incoloro , que conduce al desarrollo de color si la muestra utilizada contiene anticuerpos .
Facilidad de Prueba

Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados son comercialmente disponible . Además, es posible crear varios anticuerpos primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo secundario para la detección. Esto hace que el ELISA indirecto fácil de realizar . En el ELISA directo , los anticuerpos primarios tienen que ser específicamente preparado para reaccionar con el antígeno específico de la sospecha de estar presente en la muestra . Esto hace que el ELISA directo de desventaja en comparación con la prueba indirecta.
Rapidez de Prueba

La prueba ELISA directa es rápida en comparación con la prueba indirecta , ya que utiliza sólo un único anticuerpo . El ELISA indirecto requiere una etapa adicional de incubación con un segundo anticuerpo durante el procedimiento de prueba , lo que provoca un retraso en la obtención de resultados .
Sensibilidad

La prueba de ELISA directa es menos sensible que la forma indirecta de la prueba debido a que es mucho menos amplificación de la señal . Además , el etiquetado de la primaria de anticuerpos con una enzima puede perjudicar su perfil immonoreactivity . En el caso de la prueba ELISA indirecta , el anticuerpo primario no está marcado y por lo tanto , conserva su inmunorreactividad . Además , cada anticuerpo primario tiene muchos epítopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario , lo que permite la amplificación de la señal , la mejora de la sensibilidad del método . Sin embargo , existe la posibilidad de reactividad cruzada entre el antígeno y el anticuerpo secundario , que conduce a un error en los resultados . No existe tal posibilidad en el método ELISA directo .