Cómo medir concentraciones de catalasa

La catalasa es un catalizador biológico ( orgánico). Esta enzima es uno de los catalizadores más potentes conocidos y tiene efectos beneficiosos sobre el cuerpo humano y es crucial para la vida . La catalasa actúa como un catalizador para acelerar la descomposición de peróxido de hidrógeno . El peróxido de hidrógeno es un subproducto metabólico que es venenoso para las células si no se elimina . Catalasa ayuda en la descomposición de peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno . La catalasa también ayuda en la oxidación de otras toxinas tales como fenoles , ácido fórmico , formaldehído y alcoholes . Cosas que necesitará sobre Two 110 ml de cromógeno en tampón fosfato
300 l de sustrato - peróxido de hidrógeno al 30 %
400 μL.HRP - peroxidasa de rábano en tampón fosfato
60 ml de fosfato amortiguar
250 ml de muestra diluyente surfactante en tampón fosfato sobre Two 30 ml de sustrato tampón fosfato diluyente sobre Two 30 ml de reactivo de parada - azida de sodio de archivo: Dos frascos de 160 U /vial estándar catalasa
Espectrofotómetro
10 l pipetas ajustables Matemáticas 1 cm de longitud de vía cubetas espectrofotométricas
1.5 microtubos de polipropileno ml con tapón
tubos de ensayo - 12x75 milímetros (2,5 ml cada uno)
Timer
agua desionizada

Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Preparar el stock de catalasa que va a medir mediante la adición de 200 microlitros ( mu l ) de agua desionizada para las concentraciones de catalasa en 50 mililitros (ml ) viales . El nivel de la concentración Catalese debe ser 160 unidades por mililitro ( U /ml) .
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Añadir 30 l de catalasa diluido en tubos . Añadir 500 l de sustrato ( peróxido de hidrógeno - 10 mm de H2O2 ) en cada tubo . Tenga cuidado de no salpicar el peróxido de hidrógeno al trabajar con ella .
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incubar cada tubo individual durante un minuto a temperatura ambiente.
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Agregar 500 y mu; l de reactivo a cada vial . Tapar el vial y mezclar invirtiendo el vial arriba y hacia abajo . No agite la mezcla , agitar el vial o removerlo con un objeto.
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Añadir 20 l de cada mezcla de reacción en los tubos de ensayo. Añadir 2 ml del reactivo HRP en cada tubo de ensayo. Una vez más , mezclar la solución invirtiendo los tubos de ensayo varias veces .
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Incubar la solución de nuevo , esta vez durante 10 minutos a temperatura ambiente .
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Leer la absorbancia nivel de la solución con un espectrofotómetro . Las medidas espectrofotómetro de luz longitudes de onda para determinar exactamente qué sustancias están presentes y qué concentraciones y . Este método proporcionará una lectura precisa de las concentraciones de catalasa . La información es útil en el contexto de la interacción de la catalasa con peróxido de hidrógeno , como en este experimento , y como tiene lugar de forma natural en el cuerpo humano .