¿Cuál es una mejor manera de determinar cuándo la solución de leche se vuelve clara en el experimento de tripsina?
Aquí hay un procedimiento mejorado para determinar el punto final del experimento con tripsina usando un espectrofotómetro:
Materiales:
- Solución de tripsina
- Solución de sustrato de caseína
- Solución de hidróxido de sodio (NaOH) (0,1 M)
- Espectrofotómetro
- Cubetas
Procedimiento:
1. Prepare la mezcla de reacción:
- En una cubeta, mezcle un volumen específico de solución de sustrato de caseína (por ejemplo, 1 ml) con un volumen adecuado de solución de tripsina (por ejemplo, 0,1 ml).
- Incubar la mezcla a una temperatura adecuada (por ejemplo, 37 °C) durante el tiempo deseado (por ejemplo, varios minutos).
2. Detenga la reacción:
- A intervalos de tiempo específicos (p. ej., cada minuto), retire un pequeño volumen de la mezcla de reacción (p. ej., 0,1 ml) y transfiéralo a una cubeta separada.
- Agregue inmediatamente un volumen suficiente de solución de hidróxido de sodio (por ejemplo, 1 ml) para detener la reacción.
3. Mida la absorbancia:
- Utilice el espectrofotómetro para medir la absorbancia de cada mezcla de reacción detenida a una longitud de onda específica (por ejemplo, 440 nm).
4. Grafica la absorbancia:
- Trazar una gráfica con el tiempo (eje x) y la absorbancia (eje y).
5. Determine el punto final:
- Analizar los valores de absorbancia a lo largo del tiempo. El punto final es el momento en el que la absorbancia alcanza una meseta o muestra una disminución significativa, lo que indica una hidrólisis extensa de la caseína.
Este método proporciona una determinación del punto final más objetiva y cuantitativa en comparación con la observación visual del aclaramiento de la solución, ya que se basa en medir el cambio en la absorbancia debido a la liberación de péptidos y aminoácidos más pequeños durante la hidrólisis de la caseína.